制備型高效液相色譜儀的特點(diǎn)、原理和操作步驟

　　制備型高效液相色譜儀的主要特點(diǎn)：

　　色譜技術(shù)越來越廣泛的應(yīng)用于制藥，化工和生物工程等領(lǐng)域中樣品的分離和純化。典型的應(yīng)用如合成原料的純化，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備，產(chǎn)品的提純等方面。

　　采用步進(jìn)電機(jī)控制，輸液平穩(wěn)，雙柱塞結(jié)構(gòu)，脈動(dòng)低，性能指標(biāo)較高，輔以UV系列紫外-可見波長(zhǎng)檢測(cè)器（配半制備/制備型檢測(cè)池）及手動(dòng)/電動(dòng)進(jìn)樣閥及切換閥，即可滿足廣大用戶生產(chǎn)和研究的需要。

　　制備型高效液相色譜儀的原理：

　　儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入檢測(cè)系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的“吸附-解吸”的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測(cè)器時(shí)，樣本濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式輸出檢測(cè)結(jié)果。

　　制備型高效液相色譜儀操作步驟：

　　1) 過濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜(0.45um)。

　　2) 對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

　　3) 打開HPLC工作站（包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），連接好流動(dòng)相管道，連接檢測(cè)系統(tǒng)。4)進(jìn)入HPLC控制界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。

　　4) 有一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖洗時(shí)速度不要超過10 ml/min。

　　5) 調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on，走基線，觀察基線的情況。

　　6) 設(shè)計(jì)走樣方法。點(diǎn)擊file，選取select users and methods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊new method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣方法需要包括：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。

　　7) 進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

　　8) 關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。